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GFP和YFP激發(fā)光和發(fā)射光波長

作者:上海峰志儀器 時(shí)間:2020-05-20 19:59:05瀏覽13593 次

信息摘要:

GFP在藍(lán)光或紫外光激發(fā)下發(fā)出綠色熒光。綠色熒光蛋白基因是目前應(yīng)用的報(bào)告基因之一,檢測方便,只需激發(fā)光源,不需任何底物或輔助因子;材料可活體觀測,無需預(yù)處理;植物本身無綠色熒光,不會(huì)有假陽性。因此,它目前在動(dòng)物、植物、微生物的研究中已得到廣泛的應(yīng)用。

 上海峰志儀器有限公司現(xiàn)貨供應(yīng)便攜式熒光蛋白激發(fā)光源,能夠觀察GFP、YFP、RFP在種子、愈傷、葉片、根系以及老鼠、斑馬魚上的表達(dá)。

綠色熒光蛋白(GreenFluorescent Protein,簡稱GFP)是在美國西北海岸所盛產(chǎn)的一種名為Aequorea victoria的水母中發(fā)現(xiàn)的一種可以發(fā)出綠色熒光的蛋白質(zhì)。GFPzui早是在1962年由日本科學(xué)家下村修發(fā)現(xiàn),是由238氨基酸組成的單體蛋白質(zhì),蛋白分子量約為27kD。GFP的晶體結(jié)構(gòu)顯示,蛋白質(zhì)中央是一個(gè)圓柱形水桶樣結(jié)構(gòu),長420nm,寬240nm,由11個(gè)圍繞中心α螺旋的反平行β折疊組成,桶的頂部由3個(gè)短的垂直片段覆蓋,底部由一個(gè)短的垂直片段覆蓋,對(duì)熒光活性很重要的生色團(tuán)則位于桶的大空腔內(nèi)。實(shí)驗(yàn)表明GFP熒光產(chǎn)生的前提是桶狀結(jié)構(gòu)完整性,去除N端6個(gè)氨基酸或C端9個(gè)氨基酸,GFP均會(huì)失去熒光。原因是GFP生色團(tuán)的形成效率較低,而且形成過程受外界環(huán)境影響較大。

GFP主要使用什么波段的激發(fā)光?你觀察到得熒光是什么顏色?

GFP在藍(lán)光或紫外光激發(fā)下發(fā)出綠色熒光。綠色熒光蛋白基因是目前應(yīng)用的報(bào)告基因之一,檢測方便,只需激發(fā)光源,不需任何底物或輔助因子;材料可活體觀測,無需預(yù)處理;植物本身無綠色熒光,不會(huì)有假陽性。因此,它目前在動(dòng)物、植物、微生物的研究中已得到廣泛的應(yīng)用。

植物病毒表達(dá)載體(GFP或eGFP,RFP),農(nóng)桿菌侵染植株后,如果要觀察GFP發(fā)光,需要選用LUYOR-3415RG激發(fā)光源來照射植物,同時(shí)需要佩戴美國路陽專用的熒光觀察眼鏡,即可觀察到明亮的GFP熒光。LUYOR-3415RG的雙波段光源能夠激發(fā)GFP,eGFP和RFP,無論是綠色熒光蛋白還是增強(qiáng)型綠色熒光蛋白以及紅色熒光蛋白,LUYOR-3415RG均能夠激發(fā)出明亮的熒光,如果需要拍照,需要選用路陽專用遮光片才可以拍到熒光。路陽中國地區(qū)免費(fèi)請根據(jù)網(wǎng)頁底部聯(lián)系方式聯(lián)系:4006-254-365.也可免費(fèi)申請樣機(jī)試用。

GFP和YFP激發(fā)光和發(fā)射光波長

GFP變體的激發(fā)和發(fā)射數(shù)據(jù)

GFP VariantExcitation max (nm)Emission max (nm)
wtGFP395509
GFPuV395509
Stemmer395509
EGFP488509
GFP-S65T489509
Y66H382459
EBFP380460

YFP激發(fā)波長和發(fā)射波長

黃色熒光蛋白(Yellow Fluorescent Protein ,YFP)可以看做綠色熒光蛋白的一種突變體,來源于維多利亞多管水母( Aequorea victoria)。相對(duì)于綠色熒光蛋白,其熒光向紅色光譜偏移,而這主要是由于蛋白203位蘇氨酸變?yōu)槔野彼?。其更大激發(fā)波長為514 nm,更大發(fā)射波長為527 nm。excitation wavelength and the emission wavelength for yfp.

Yellow  Fluorescent Proteins Excitation Emission

如何能觀測YFP黃色熒光蛋白的表達(dá)?

美國路陽生產(chǎn)有多款便攜式激發(fā)光源,無需熒光顯微鏡就能輕松觀察篩選黃色熒光蛋白表達(dá)陽性。LUYOR-3260CY便攜式Y(jié)FP激發(fā)光源能直接分選YFP表達(dá)陽性的植株,能夠分選愈傷組織、植株、種子、菌落等。如欲進(jìn)一步了解便攜式熒光蛋白激發(fā)光源,可直接聯(lián)系上海峰志儀器有限公司的銷售客服。

黃色熒光蛋白(YFP)在線蟲上的表達(dá)

上圖為黃色熒光蛋白(YFP)在線蟲上的表達(dá)(體視顯微鏡熒光適配器下觀察效果)

GFP在煙草葉片的表達(dá)

上圖為GFP在煙草葉片的表達(dá)(LUYOR-3415RG激發(fā)光源照射下觀察的效果)

Yellow Fluorescent Proteins/常用黃色熒光蛋白的激發(fā)波長和發(fā)射波長


YFP種類 Excitation 激發(fā)光波長(nm) Emission發(fā)射光波長(nm)
EYFP514527
Topaz514527
Venus515528
mCitrine516529
YPet517530
TagYFP508524
PhiYFP525537
ZsYellow1529539
mBanana540553

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