觸發(fā)gfp發(fā)出熒光的光源有哪些?
GFP又名 wtGFP, avGFP, gfp10, 綠色熒光蛋白
GFP綠色熒光蛋白是一種基本的(構(gòu)成熒光的)長斯托克斯位移熒光蛋白,發(fā)表于1992年,來源于Aequorea victoria。它對酸的敏感性低。GFP激發(fā)光的波長是395nm,mEGFP發(fā)射光的波長是509nm。
很多同學(xué)覺得GFP和EGFP、avGFP都是綠色熒光蛋白,激發(fā)波長應(yīng)該都一樣,用便攜式熒光蛋白激發(fā)光源的450nm波段去觀察GFP的表達(dá),但有時候無法看到gfp的熒光表達(dá),不知道是設(shè)備原因還是沒有表達(dá)成功。
大家在觀察熒光蛋白表達(dá)之前,一定要看自己質(zhì)粒圖譜用的到底是哪種GFP,如果是GFP、wtGFP、avGFP必須用紫外光源去激發(fā)(365nm波段,LUYOR-3280UV應(yīng)該手電筒),如果的eGFP、mEGFP那要藍(lán)光波段(450nm LUYOR-3280RB)去激發(fā)。
EGFP綠色熒光蛋白是1996年發(fā)表的一種堿性(構(gòu)成性熒光)綠色熒光蛋白,來源于Aequorea victoria。據(jù)報(bào)道,它是一種快速成熟的弱二聚體,具有中等酸敏感性。mEGFP激發(fā)光的波長是488nm,mEGFP發(fā)射光的波長是507nm。
mEGFP綠色熒光蛋白是2002年發(fā)表的一種堿性(構(gòu)成性熒光)綠色熒光蛋白,來源于Aequorea victoria。它具有中等酸敏感性。mEGFP激發(fā)光的波長是488nm,mEGFP發(fā)射光的波長是507nm。
sfGFP綠色熒光蛋白的激發(fā)波長主峰在488nm,發(fā)射波長主峰在507nm。
常用的報(bào)告基因包括:lacZ、Egfp 、zsGreen、EYFP、DsRed (DsRed2)、mRFP、mCherry、HuCD2、Thy1.1、HA tag、FLAG tag、Luciferase等。zsGreen和EGFP, EYFP都是綠色熒光。EGFP和EYFP很難區(qū)分開。zsGreen是一個比較穩(wěn)定的綠色熒光蛋白。DsRed和TdTomato都是紅色熒光。TdTomato是一個信號非常強(qiáng)的熒光蛋白,對細(xì)胞/小鼠也沒有明顯的毒性。mRFP和mCherry是兩個非常好的熒光蛋白,需要530nm的激發(fā)光,所以可以用LUYOR-3415RG熒光蛋白觀察燈激發(fā),能夠用肉眼觀察到熒光蛋白在小鼠上的表達(dá)。
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