瓊脂糖核酸電泳的理論知識

DNA分子是一種自身不會發(fā)出熒光的大分子，需要相應(yīng)的核酸分子染料結(jié)合到DNA分子的大溝處，通過激發(fā)光激發(fā)DNA –核酸染料復(fù)合物，復(fù)合物會發(fā)出一束強(qiáng)熒光，通過相應(yīng)的濾光片過濾得到單波長的發(fā)射光，通過照相機(jī)或者肉眼捕獲就能夠檢測到相應(yīng)的DNA分子（圖1）。

從核酸電泳發(fā)展至今，絕大多數(shù)的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室選擇溴化乙錠（EtBr，也簡稱EB）作為核酸分子染料，由于EB的光譜特性（圖2），又不得不選擇紫外光作為激發(fā)光。EB分子因其分子量較小，容易透過細(xì)胞膜，因此是一種致癌性極強(qiáng)的有機(jī)小分子。而紫外透射儀的紫外光（UV）照射也會誘發(fā)基因突變，不僅會引發(fā)實(shí)驗(yàn)樣品的基因突變，也會對實(shí)驗(yàn)人員造成一定的傷害。為了解決EB分子的致癌問題，科研工作者通過有機(jī)合成技術(shù)將兩個EB分子通過有機(jī)分子鏈連在了一起，解決了EB分子因分子量比較小容易通過細(xì)胞膜的問題，連在一起的分子被稱為GelRed（圖3）。這雖然解決了染料相對安全的問題，可激發(fā)光依然是UV，不能夠從本質(zhì)上解決對實(shí)驗(yàn)樣品和實(shí)驗(yàn)操作者自身的安全問題。

(注：302 nm為更大激發(fā)光波峰，在500 nm左右也有一波峰，但峰面積和高度比較小，相對302nm，靈敏度降低；發(fā)射光波峰位于610nm左右)

圖3：EB分子與GelRed的分子結(jié)構(gòu)

事實(shí)上，除了EB和GelRed這兩種以UV為激發(fā)光的核酸分子染料，還存在另一類核酸分子染料，如：GelGreen、SYBR Green、SYBR Gold、LED Green、SYBR Safe、GoldView等以480nm藍(lán)光為激發(fā)光的核酸染料，這類染料分子量相對較大，細(xì)胞膜通透性較差，因此對實(shí)驗(yàn)人員帶來的危害較小，相對EB分子是一種較安全的核酸分子染料。

(注：480 nm為更大激發(fā)光波峰，在350 nm左右也有一波峰，但峰面積和高度比較小，相對480nm，靈敏度降低；發(fā)射光波峰位于550 nm左右)

由于波長470nm藍(lán)光屬于可見光，不會對實(shí)驗(yàn)樣品造成破壞，也不會對實(shí)驗(yàn)人員造成危害，因此470nm的藍(lán)光搭配安全核酸分子染料能夠更大程度降低核酸瓊脂糖凝膠電泳帶來的潛在危險。也是基于此，東勝eBL-100藍(lán)光切膠儀上市了。

東勝eBL-100藍(lán)光切膠儀是PCR擴(kuò)增儀的后續(xù)儀器，也是分子實(shí)驗(yàn)室的必備儀器。用于凝膠電泳實(shí)驗(yàn)的觀測、切膠。圖像清晰，使用方便?？捎檬謾C(jī)拍攝電泳圖片，快速分享到手機(jī)、電腦等終端。用于替代傳統(tǒng)的紫外透射儀。采用LED藍(lán)光激發(fā)，極大保護(hù)了實(shí)驗(yàn)人員的眼睛、臉、手等暴露部位不再遭受紫外線的傷害。

eBL-100藍(lán)光切膠儀產(chǎn)品特點(diǎn)

高亮、高清、高靈敏

144顆長壽命LED陣列

無傷害藍(lán)光光源

適用多種染料

操作步驟

切膠

拍照

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eBL-100藍(lán)光切膠儀性能參數(shù)

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