sfGFP是superfolder GFP的縮寫,它是一種設(shè)計精良的折疊版本的GFP,對化學變性劑和極端溫度顯示更大的耐受力。Superfolder GFP是2005年發(fā)表的一種基本(構(gòu)成熒光)綠色熒光蛋白,來源于Aequorea victoria。據(jù)報道,它是一種非常快速成熟的弱二聚體。Superfolder GFP源自Folding Reporter GFP,具有以下突變:S30R/Y39N/N105T/Y145F/I171V/A206V
superfolder GFP的激發(fā)光和發(fā)射光:
sfGFP的激發(fā)光是·485nm,發(fā)射光為510nm
Superfolder GFP EX:485nm,Superfolder GFP EM:510nm
superfolder GFP的激發(fā)光和發(fā)射光的光譜圖
eGFP和GFP的區(qū)別:
GFP(綠色熒光蛋白)是一種在藍光或紫外光下發(fā)出綠色光的蛋白質(zhì)。它天然存在于水母維多利亞水母中。GFP由238個氨基酸組成。GFP 的大小為 26.9 kDa。GFP 是分子生物學中的強大工具,因為它具有內(nèi)在的熒光,沒有任何輔助分子。熒光是由于蛋白質(zhì)的連續(xù)氨基酸的共價重排。蛋白質(zhì)折疊后,主鏈原子 Ser65、Tyr66 和 Gly67 在 O 2存在下形成高度共軛的平面對羥基苯亞甲基咪唑啉酮發(fā)色團. 晶體結(jié)構(gòu)研究表明,發(fā)色團填充在分子的 β-桶結(jié)構(gòu)的核心內(nèi)可防止其因順磁氧、水偶極子或順反異構(gòu)化而猝滅。此外,發(fā)色團與相鄰分子的非共價相互作用增強了其光譜特性。
EGFP(增強型綠色熒光蛋白)是野生型 GFP 的變體,相對于 GFP 具有更高強度的發(fā)射。它是個也是重要的 GFP 變體之一。兩個突變 F64L 和 S65T 在 37 °C 下產(chǎn)生具有更高折疊效率的 EGFP。有趣的是,由于 S65T 對 395 nm 峰的抑制,EGFP 在 ~490 nm 處具有單個激發(fā)峰,因為它調(diào)節(jié)附近 Glu222 的電離狀態(tài)。另一方面,F(xiàn)64L 提高了 37 °C 時的折疊效率。重要的是,EGFP 的密碼子序列針對在哺乳動物細胞中的表達進行了優(yōu)化。
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