LUYOR-3415RG用于大豆根系轉(zhuǎn)化的檢測

近日，華中農(nóng)業(yè)大學(xué)在《new phytologist》期刊發(fā)表了文獻(xiàn)《The miR156b-GmSPL9d module modulates nodulation by targeting multiple core nodulation genes in soybean》，作者使用了美國路陽生產(chǎn)的便攜式雙波長熒光蛋白激發(fā)光源用于檢測大豆毛根的轉(zhuǎn)化。LUYOR-3415RG便攜式熒光激發(fā)光源能夠檢測動(dòng)植物體內(nèi)的熒光蛋白的表達(dá)。無需熒光顯微鏡，通過熒光觀察眼鏡就能直接觀察熒光蛋白的表達(dá)。以下是文獻(xiàn)摘要，具體文獻(xiàn)全文鏈接在本文末尾。

大豆是蛋白質(zhì)的zui佳來源之一，是人類和動(dòng)物飲食的主食。由于大豆富含蛋白質(zhì)，因此在發(fā)育和繁殖過程中，它對(duì)氮（N）的需求比其他作物高得多。大豆與土壤中固氮細(xì)菌建立了共生關(guān)系，這些細(xì)菌能夠轉(zhuǎn)化大氣中的二氮（N2）轉(zhuǎn)化為氨，這有助于滿足其高氮需求。作為交換，大豆植物為這些細(xì)菌提供碳水化合物和其他營養(yǎng)物質(zhì)，以促進(jìn)根瘤菌的生長和增殖。共生固氮不僅有利于提高大豆的產(chǎn)量，而且是增加耕地氮供應(yīng)以提高其他谷類作物產(chǎn)量的有力手段。因此，共生固氮是與大豆作物產(chǎn)量和質(zhì)量以及一般可持續(xù)農(nóng)業(yè)相關(guān)的主要因素。

共生氮固定發(fā)生在大豆的指定根器官（例如根結(jié)節(jié)）中，該根瘤以根瘤菌為宿主。當(dāng)土壤中的氮含量低時(shí)，大豆釋放異黃酮（例如染料木黃酮）以誘導(dǎo)根瘤菌產(chǎn)生點(diǎn)綴因子（NFs）。NF被大豆NF受體（NFR1和NFR5）感知并觸發(fā)調(diào)節(jié)根瘤感染和結(jié)節(jié)器官發(fā)生的信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)，其由一系列發(fā)育過程組成，包括根外皮質(zhì)細(xì)胞的去分化，結(jié)節(jié)原始形成，結(jié)節(jié)出現(xiàn)和結(jié)節(jié)成熟。已經(jīng)表明，根瘤菌感染和結(jié)節(jié)器官發(fā)生的發(fā)作是由結(jié)節(jié)信號(hào)通路介導(dǎo)的，在過去三十年中已經(jīng)確定了許多關(guān)鍵成分。其中，結(jié)節(jié)起始（NIN），一種RWP-RK轉(zhuǎn)錄因子和早期結(jié)節(jié)蛋白基因（例如ENOD40），是zui早確定的豆類結(jié)節(jié)所必需的調(diào)節(jié)因子，包括大豆。

LUYOR-3415RG用于大豆毛根轉(zhuǎn)化和重氮化芽孢桿菌接種

根據(jù)前面描述的方法，使用根瘤菌K599進(jìn)行大豆毛根轉(zhuǎn)化以生成復(fù)合植物）。對(duì)于根瘤菌接種，將轉(zhuǎn)基因復(fù)合植物移植到含有蛭石的花盆（10×10厘米）中，用Y. Wang等人描述的N-缺乏溶液灌溉。（2009）. 植物生長了1周的恢復(fù)期（16小時(shí)的光照，25°C和50%的相對(duì)濕度）。然后將植物接種在新制備的雙氮二元組菌株USDA110（OD）懸浮液中。600= 0.08）。接種后28 d，對(duì)每個(gè)毛根或每個(gè)根系的結(jié)核數(shù)進(jìn)行評(píng)分，并在PBS（pH 7.5）中對(duì)根或結(jié)節(jié)進(jìn)行短暫沖洗，立即在液氮中冷凍并儲(chǔ)存在-80°C下進(jìn)行基因表達(dá)分析。對(duì)于miR156b/f-CRISPR/Cas9復(fù)合植株的表型分析，我們首先計(jì)算了復(fù)合植株每個(gè)毛根的結(jié)節(jié)數(shù)，然后提取DNA檢測出可選擇的標(biāo)記條基因。通過Sanger測序驗(yàn)證了推定的轉(zhuǎn)基因根系。對(duì)于GmSPL9d-CRISPR / Cas9根的表型分析，我們使用便攜式熒光手電筒鑒定了轉(zhuǎn)基因毛茸茸的根（LUYOR-3415RG，上海，中國）。檢查了每個(gè)轉(zhuǎn)基因根的結(jié)節(jié)數(shù)量，并通過Sanger測序證實(shí)了轉(zhuǎn)基因根系的突變。

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詳細(xì)介紹：便攜式熒光蛋白激發(fā)光源LUYOR-3415RG

文獻(xiàn)地址：https://doi.org/10.1111/nph.17899   

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